如何添加网站关键词,贵港北京网站建设,ui设计课程内容,微信小程序加盟招商纳米抗体#xff08;nanobodies#xff0c;Nbs#xff09;是由比利时科学家Hamers等人在骆驼血液内首次发现的一种新型抗体#xff0c;与传统抗体相比#xff0c;这种抗体不存在轻链#xff0c;只有重链抗体#xff08;HcAb#xff09;和两个常规的CH2和CH3区组成… 纳米抗体nanobodiesNbs是由比利时科学家Hamers等人在骆驼血液内首次发现的一种新型抗体与传统抗体相比这种抗体不存在轻链只有重链抗体HcAb和两个常规的CH2和CH3区组成分子量只有15 KDa左右被称为纳米抗体。HcAb 的特异性仅依赖于称为 VHH 的重可变域。VHH 的重组产物被称为单域抗体 (sdAb) 或纳米抗体的片段[1]。
一、纳米抗体相对传统抗体的优势
1和靶点结合特异性更强
2更高的组织穿透力
3更高的稳定性如耐高温
4适合工业化大规模生产
5更容易改造和优化
6更容易人源化
二、纳米抗体的制备方法 传统单克隆抗体通常用杂交瘤的方法进行制备而纳米抗体则多通过噬菌体展示技术进行制备。 噬菌体展示技术即纳米抗体技术是将外源蛋白或多肽的DNA序列插入M13噬菌体的P3蛋白基因序列的适当位置以达到外源基因随噬菌体外壳蛋白的表达而在噬菌体表面进行展示的目的。噬菌体展示的优势在于其展示纳米抗体文库中变异抗体基因的多样性各个重组噬菌体常用噬菌体为M13噬菌体表面展示出不同的抗原结合域相较于传统杂交瘤方法噬菌体展示技术在抗体基因展示与筛选层面则具有非常突出的效率优势如杂交瘤融合效率一般0.4%即1000次融合细胞中大概4个融合子而噬菌体展示轻松可以获得108-109个正确抗体序列。
三、纳米抗体的制备流程 纳米抗体的制备流程主要分为羊驼免疫噬菌体文库构建筛选抗体库、抗体表达与功能验证四个步骤[2]。 为了建立免疫库首先必须给年轻的、健康的美洲驼、单峰骆驼、羊驼等进行免疫。通常在2个月的时间跨度内动物被注射4-8次目标抗原和佐剂的混合物。一般每次注射约50-200μg免疫原确切数量显然取决于抗原分子量更取决于其免疫原性和/或毒性。 免疫原类型使用可溶性、正确折叠的重组蛋白是首选推荐也有直接DNA免疫。通常混合多达10种蛋白质来免疫动物但更复杂的混合物也有被使用例如病毒、细菌、寄生虫、完整的小鼠脾细胞或癌细胞的蛋白质提取物[3]。 为了增加特定表位成功获得纳米抗体的可能性建议对一个以上的动物进行免疫。它们是近系繁殖的动物每一个动物都会产生独特的免疫反应获得更大的纳米抗体 panel从中选择表现最好的纳米抗体。 一些研究显示与美洲驼和羊驼相比骆驼或单峰骆驼中HCAb抗体比经典抗体的比例更高。免疫接种后取50-100毫升抗凝血通常来自颈静脉尽管淋巴结活检也是一种很好的原料制备淋巴细胞和提取mRNA。将mRNA转化为cDNA用于扩增VHH基因两步巢式PCR。 一些分子如RNA或DNA没有免疫原性不能刺激产生HCAb或者有些化合物毒性太大、传染性太强或对动物或环境有害在这种情况下可以设想构建一个天然纳米抗体库或一个合成的纳米抗体库。 为了能够筛选到高亲和力的纳米抗体天然抗体库的大小一般达到109-1010其中80%左右应该编码纳米抗体。为了构建这样一个大而多样的天然纳米抗体库需要从多个动物收集血液(至少10只动物以避免由于过敏或以前感染导致的HCAbs产生偏差)。预计每mL血液有106个淋巴细胞而只有一小部分是B细胞并且约50%可能表达HCAb所以需要10L血液来构建1010个不同VHH克隆的纳米抗体库。 卡梅德生物KMD Bioscience(https://www.kmdbioscience.cn/)建立了一个完善的、成熟的噬菌体抗体展示技术平台。基于噬菌体展示技术平台卡梅德生物可以提供包括抗原设计、羊驼免疫、文库构建与筛选、活性功能验证等主要实验环节并为全球的科学家提供高特异性和高亲和力的羊驼VHH抗体。此外卡梅德生物拥有丰富的抗体工程构造经验能够进行立体化的抗体上下游服务包括抗体人源化服务、人源scFV抗体库构建服务、人源Fab抗体文库构建服务、人源抗体噬菌体文库制备服务以及磷酸化抗体定制服务、抗体亲和力成熟服务等满足不同客户的科研要求。 这篇文章可供科研爱好者参考。它不能代替需要更详细和专业信息的专业知识或实践实验程序。如果有任何内容侵权请联系作者立即删除有争议的材料。 参考文献
Muyldermans S. Nanobodies: natural single-domain antibodies. Annu Rev Biochem. 2013;82:775-97.De Genst E, Saerens D, Muyldermans S, Conrath K. Antibody repertoire development in camelids. Dev Comp Immunol. 2006;30(1-2):187-98.Rossotti MA, Trempe F, van Faassen H, Hussack G, Arbabi-Ghahroudi M. Isolation and Characterization of Single-Domain Antibodies from Immune Phage Display Libraries. Methods Mol Biol. 2023;2702:107-147.
